小心培養(yǎng)的細(xì)胞就這樣死掉了，是個(gè)很心痛的事情。其實(shí)影響細(xì)胞存活率的原因有很多，有時(shí)候并不是二氧化碳培養(yǎng)箱本身出了問題，我們的許多操作對(duì)細(xì)胞培養(yǎng)的結(jié)果也是有很大影響的，今天為大家分享一下使用二氧化碳培養(yǎng)箱對(duì)細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)時(shí)應(yīng)該注意的問題。

　　1.確保所有實(shí)驗(yàn)室材料都無菌

　　交叉污染是細(xì)胞培養(yǎng)的大敵。即使是輕微的污染，也可能毀了幾個(gè)星期的成果。因二氧化碳培養(yǎng)箱內(nèi)溫暖潮濕，真菌極易生長，因此必須注意定期清潔。此外，在將培養(yǎng)瓶、移液管及其他的相關(guān)物品放入超凈臺(tái)之前，應(yīng)用酒精擦拭干凈，以避免污染。

　　2.小心處理您的培養(yǎng)物

　　細(xì)胞培養(yǎng)的脆弱性怎么強(qiáng)調(diào)也不為過。劇烈搖晃，或連續(xù)的溫度波動(dòng)可能會(huì)對(duì)生長產(chǎn)生不利的影響。確保培養(yǎng)箱是水平的，溫度均一，且遠(yuǎn)離電動(dòng)儀器。此外，盡量避免一次處理多個(gè)細(xì)胞系，因?yàn)樗赡軙?huì)影響細(xì)胞的基因型和表型。您還應(yīng)定期完成STR圖譜分析，以確認(rèn)細(xì)胞系的身份。

　　3.在使用前正確解凍細(xì)胞

　　盡管解凍看起來是個(gè)簡單的步驟，但必須操作得當(dāng)，以免傷害細(xì)胞。長時(shí)間暴露在高溫條件下會(huì)使細(xì)胞無法鋪板。因此，凍存管應(yīng)當(dāng)在37°C水浴中放置2分鐘，然后用條件培養(yǎng)基稀釋，以避免DMSO造成直接傷害。

　　4.使用對(duì)數(shù)生長期的細(xì)胞

　　細(xì)胞培養(yǎng)過程共有3個(gè)階段：停滯期、對(duì)數(shù)期和平臺(tái)期，分別代表了低細(xì)胞生長、高細(xì)胞生長和無細(xì)胞生長。有活力的細(xì)胞是健康的，快速分裂的，在對(duì)數(shù)期以70-80%的匯合度存在。

　　5.在傳代之前不要讓細(xì)胞*匯合

　　匯合度是指貼壁細(xì)胞占據(jù)培養(yǎng)瓶表面積的比例。*匯合意味著100%的表面都被貼壁細(xì)胞覆蓋。一定要避免這種狀態(tài)，因?yàn)樗馕吨?xì)胞不能繼續(xù)生長。不過，當(dāng)務(wù)之急是使用活躍生長的細(xì)胞。

　　6.選擇*的培養(yǎng)基開發(fā)策略

　　在細(xì)胞培養(yǎng)過程中，培養(yǎng)基是控制產(chǎn)品質(zhì)量、產(chǎn)量和成本的重要因素。必須針對(duì)每種培養(yǎng)物來定制培養(yǎng)基，以優(yōu)化實(shí)驗(yàn)結(jié)果。在決定以哪種方式來開發(fā)您的培養(yǎng)基時(shí)，您有幾個(gè)選擇。您可以購買現(xiàn)成的，自己開發(fā)，也可以與另一家公司合作開發(fā)特定的培養(yǎng)基。在這個(gè)過程中，您需要考慮時(shí)間和成本等因素。

　　7.配制干粉培養(yǎng)基時(shí)評(píng)估水的質(zhì)量

　　液體培養(yǎng)基往往會(huì)帶來比干粉培養(yǎng)基更高質(zhì)量的結(jié)果。這可能與水的質(zhì)量有關(guān)。由于細(xì)菌在水中迅速生長，故需要監(jiān)控內(nèi)毒素及其他污染物。商業(yè)公司有資源來監(jiān)控和控制細(xì)菌生長，比如過濾器。因此使用商業(yè)化生產(chǎn)的液體培養(yǎng)基會(huì)更加可靠一點(diǎn)。

　　8.利用細(xì)胞的代謝特性來優(yōu)化培養(yǎng)基

　　分析使用過的培養(yǎng)基，有助于鑒定必要成分的代謝速率，包括氨基酸和維生素。從細(xì)胞生長階段和蛋白生產(chǎn)階段收集到的動(dòng)態(tài)代謝圖譜可用來平衡基礎(chǔ)培養(yǎng)基和添加培養(yǎng)基，指導(dǎo)培養(yǎng)基的重點(diǎn)，有助于蛋白質(zhì)的生產(chǎn)。

　　9.避免細(xì)胞的過度消化

　　胰蛋白酶通過消化負(fù)責(zé)讓細(xì)胞與容器結(jié)合的蛋白質(zhì)，而實(shí)現(xiàn)貼壁細(xì)胞的傳代。如果細(xì)胞暴露在胰酶中時(shí)間太長，則胰酶將開始切割細(xì)胞表面蛋白，這會(huì)影響細(xì)胞行駛正常功能的能力。

　　10.培養(yǎng)基中不要一直使用抗生素

　　隨著細(xì)胞培養(yǎng)物更加頻繁地暴露在抗生素中，對(duì)抗生素有著天然耐藥性的菌株將開始出現(xiàn)，這種現(xiàn)象可掩蓋潛在的污染。